Anwendung des Veterinär-Laparoskops bei der Sammlung von Rinder-Oozyten In-vitro-Fertilisation
Anwendung des Veterinär-Laparoskops bei der Gewinnung von Rinder-Oozyten in vitro-Fertilisation.
Die Gewinnungsrate von Eizellen, die durch laparoskopische Technik gewonnen werden, ist einfacher als die der Eizellen direkt aus dem Ovar. Darüber hinaus kann die veterinärmedizinische Laparoskopie verwendet werden, um die Follikelentwicklung zu überprüfen.
Einführen des Laparoskops: Führen Sie den stumpfen Trokar in die Kanüle ein, führen Sie die Kanüle in die Vagina ein, positionieren Sie das vordere Ende der Kanüle durch den Rektalgriff an der vorbestimmten Position des Vaginalgewölbes, ziehen Sie dann den stumpfen Trokar zurück, führen Sie den Pyramidentrokar ein und den Winkel anpassen. Die Richtung des Trokars und der Längsachse der Kuh in einem Winkel von 10° leicht nach rechts richten und das Scheidengewölbe kräftig nach oben durchdringen. Wenn der Widerstand plötzlich nachlässt, deutet dies darauf hin, dass das Scheidengewölbe durchbohrt wurde. Nehmen Sie zu diesem Zeitpunkt den Trokar heraus. Wenn Sie das Geräusch von einströmender Luft hören und die Hand, die das Rektum hält, gleichzeitig die Ausdehnung der Bauchhöhle spürt, zeigt dies an, dass die Piercingposition korrekt ist. In die Hülse wird die Edelstahlhülse mit dem Endoskopschaft eingeführt. Nach dem Gefühl des Mastdarms muss die Höhle, wenn sie klein ist, mit etwas CO2 gefüllt werden. Die Geschwindigkeit des Lufteinlasses sollte im Allgemeinen auf 7~L/min geregelt werden. Die eingefüllte Gasmenge hängt von der Größe der Kuh ab."Im Allgemeinen sind es etwa 9 Liter.
Entnahme von Eizellen: Der Rektumgreifer sollte die Position des Laparoskops und des Eierstocks ständig anpassen und die Form der Follikel und des Gelbkörpers an verschiedenen Positionen am Eierstock anzeigen, um die zu punktierenden Follikel zu bestimmen. Ein Assistent ergreift das Passwort des Bedieners und den Follikel, der entsprechend dem Rektum auf dem Bildschirm angezeigt wird, bedient die Punktionsnadel, sammelt die Follikelflüssigkeit und gibt die Follikelflüssigkeit in das Sammelröhrchen, dem eine kleine Menge Kulturflüssigkeit hinzugefügt wurde. Ein weiterer Helfer ist für die Bedienung der Fußvakuumpumpe zuständig. Um den Verlust von Eizellen zu vermeiden, sollte die Vakuumpumpe vor der Punktion gestartet werden (der Unterdruck sollte 100 mm Hg betragen). Nach der Entnahme wird die Follikelflüssigkeit für 5-10 Minuten in das Reagenzglasgestell gestellt. und die Follikelflüssigkeit am Boden des Sammelröhrchens wird mit einem Strohhalm in die Platte gesaugt und dann unter einem optischen Mikroskop beobachtet. Und die nachgewiesenen Eizellen werden in das dünne Röhrchen gesaugt. Die beiden Enden des dünnen Röhrchens werden verschlossen und die Eizellen können zur Reifekultur ins Labor transportiert werden. Nach Beendigung der Operation wird der Endoskopschaft herausgenommen und die beiden Assistenten drücken auf beiden Seiten der Bauchwand der Kuh, um das Gas in der Bauchhöhle zu vertreiben. Wenn das Gas nicht mehr austritt, wird die Kanüle herausgenommen und die Vagina jeden zweiten Tag kontrolliert, um eine Infektion zu vermeiden. Die beiden Enden des dünnen Röhrchens werden verschlossen und die Eizellen können zur Reifekultur ins Labor transportiert werden. Nach Beendigung der Operation wird der Endoskopschaft herausgenommen und die beiden Assistenten drücken auf beiden Seiten der Bauchwand der Kuh, um das Gas in der Bauchhöhle zu vertreiben. Wenn das Gas nicht mehr austritt, wird die Kanüle herausgenommen und die Vagina jeden zweiten Tag kontrolliert, um eine Infektion zu vermeiden. Die beiden Enden des dünnen Röhrchens werden verschlossen und die Eizellen können zur Reifekultur ins Labor transportiert werden. Nach Beendigung der Operation wird der Endoskopschaft herausgenommen und die beiden Assistenten drücken auf beiden Seiten der Bauchwand der Kuh, um das Gas in der Bauchhöhle zu vertreiben. Wenn das Gas nicht mehr austritt, wird die Kanüle herausgenommen und die Vagina jeden zweiten Tag kontrolliert, um eine Infektion zu vermeiden.
Vorsichtsmaßnahmen:
1. Anästhesie: nicht zu flach oder zu tief. Eine wirksame Anästhesie ist eine Voraussetzung für den Abschluss der Follikelpunktion zur Gewinnung von Eizellen. Wenn die Anästhesie zu flach ist, verspürt die Kuh Schmerzen und beeinträchtigt die Genauigkeit der Operation, und die Anästhesie sollte ergänzt werden. Wenn die Narkose zu tief ist, wird die Kuh nicht stabil stehen oder sogar liegen, was die Operation ebenfalls beeinträchtigt. Liegt die Kuh im Liegen, sollte die Operation sofort abgebrochen und Kanüle und Laparoskopierohr zügig herausgezogen werden. Gleichzeitig sollte darauf geachtet werden, das Baoding rechtzeitig freizugeben, um Verletzungen der Kuh zu vermeiden.
2. Punktion: Der Rektumgreifer sollte beim Punktieren des Vaginalgewölbes den Punktionswinkel korrekt erfassen, um eine Punktion des Rektums und des Dickdarms zu verhindern. Bei der Punktion des Follikels sollte die Nadel nicht zu tief eingestochen werden, da sie sonst die Eierstocksubstanz schädigt und zu Blutungen führt. Dies wird nicht nur die Follikelflüssigkeit kontaminieren, den Nachweis von Eizellen beeinträchtigen, die Nadeln und Gänge blockieren, sondern auch die Entwicklung der Follikel am Eierstock beeinträchtigen. genesen. Im Falle einer Blutung sollte die Follikelpunktion sofort gestoppt werden, Nadel und Katheter und Entnahmeröhrchen sollten ersetzt werden und Nadel und Katheter sollten vor der nächsten Follikelpunktion mit 0,01 mg Heparin/ML Kochsalzlösung gespült werden.
3. Sammlung von Follikelflüssigkeit: Die gesammelte Follikelflüssigkeit sollte möglichst konstant auf einer konstanten Temperatur gehalten werden. Die Eizellen werden am besten direkt nach der Entnahme nachgewiesen und in reifes FSH-haltiges Nährmedium gelegt, in dünne Röhrchen verpackt und ins Labor transportiert, in der Regel von Die Zeit von der Ernte bis zum Inkubator für die Reifungskultur sollte 4 Stunden nicht überschreiten.
4. Fertigkeiten: Der erfolgreiche Einsatz dieser Methode erfordert nicht nur eine gute Ausrüstung, sondern auch ein hohes Maß an Kenntnissen und Fertigkeiten in der praktischen Bedienung des Bedieners sowie eine enge Zusammenarbeit mit zwei Assistenten. Daher muss vor dem Versuchsbetrieb die notwendige Schulung durchgeführt werden.
Darüber hinaus können mit diesem Verfahren auch Eizellen von jungen Kühen vorab gewonnen werden, wodurch die Nutzungsdauer und das Reproduktionspotential der Kühe erhöht und der genetische Fortschritt beschleunigt wird. Diese Methode ist ein guter Weg, um Eizellen nach der Superovulation und der Verwendung von isolierten Eierstöcken zu erhalten.
